765.隐蔽、狡猾、善变（2/4）
例取决于特定的肿瘤模型和微环境。为了监测同源 模型中 的丰度，我们通过免疫表型分析确定了接种后肿瘤的生长以及 小鼠中不同时间点的总体 及其亚群。
如图1所示，肿瘤组织中总的百分比随着肿瘤的发展而稳步增加，从接种后第一周肿瘤浸润淋巴细胞的不到10%（5.84±1.22%）上升到第四周超过20%（21.71± 3.22%）（&;;;0.01）。在我们的 模型中，-占总 的 94.94 ±8.47%，并且与总 具有相同的肿瘤发展趋势（ &;;; 0.05）。对亚群进行分析，虽然- 增加了大约5 倍，但差异没有统计学意义。
为了更好地了解 的全身分布，我们还研究了 在外周血、脾脏和骨髓中的比例。仅在接种细胞一周后，b小鼠外周血中的百分比是无瘤小鼠的两倍(27.33±4.62%. 12.48±0.93%， &;;;0.05)， 3周后的百分比是无瘤小鼠的5倍(27.33±4.62% . 12.48±0.93%，&;;;0.05)。b小鼠外周血中-的比例也增加，而-的比例与肿瘤大小无关。
-1 是肿瘤细胞、、巨噬细胞和树突状细胞表达的最重要的检查点分子之一。为了确定b 小鼠 的 -1 表达是否与健康小鼠不同，我们通过流式细胞术测试了 的 -1 表达。结果表明，中上-1的平均荧光强度（）从在 细胞接种后的第一周386.8± 100.9 .逐渐增加到第四周的1，068.0 ±121.8 .（ &;;;0.01），这表明-1 在我们模型中的 中具有潜在作用。
在脾脏和骨髓中，随着肿瘤的发展，的比例也显著增加，其模式与肿瘤组织和外周血中的相同。此外，我们在b小鼠中观察到明显的脾肿大，这与我们观察到的在脾内聚集一致。
为了确定局部照射对肿瘤生长和的影响，当肿瘤直径达到7.5 时，我们使用大分割r(20 /)治疗皮下肿瘤。放疗导致肿瘤进展延迟长达一周，在第7至第10天的最小体积约为500 3，但此后肿瘤开始再生。根据放疗前后肿瘤生长曲线，我们选择放疗后第3天为再生前生长，放疗后1周为肿瘤体积最小时为再生开始，放疗后2周和3周为再生阶段。肿瘤组织苏木精-伊红染色显示，与未治疗的肿瘤相比，放疗后的肿瘤中有更多的浸润性炎症细胞。随后的11b特异性免疫组化染色显示，大多数炎症细胞是11b+髓系细胞，这表明局部照射可能导致的积累。为了证实我们的假设，我们在局部照射后的不同时间点对总和这两个亚群进行了流式细胞术分析。局部照射后，放疗后肿瘤浸润的比例比未治疗肿瘤高2倍(r. r=21.33±3.29% . 44.10±3.00%，&;;;0.001)。-与总具有相同的增加趋势(r. r=16.37±2.47% . 38.66±4.24%，&;;;0.001)，而-比例保持在约0.1%，且与肿瘤大小和治疗无关。外周血情况同肿瘤组织。
为了确定受照射肿瘤中- 的逐渐积累是否有助于 肿瘤的再生长，或者这种积累是否仅仅是肿瘤生长的结果，使用抗-6 单克隆抗体来消耗 .抗-6抗体的应用显着降低了肿瘤部位和外周血中-的频率（&;;;0.05）。此外，用抗 -6 抗体治疗大大延迟了照射后的再生，这表明-的募集对肿瘤再生至关重要。
虽然-利用一系列机制来抑制抗肿瘤免疫反应，这涉及到许多免疫细胞和细胞因子，但对8+细胞的抑制无疑是最重要的。为了确定r 后 - 诱导的免疫抑制是否依赖于8 + 细胞，我们通过流式细胞术评估了8 + 细胞的数量和功能。
如图3 所示，8 + 细胞的百分比
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